真选组未成立之前曾是乡下的一家普通道馆，冲田总悟的姐姐冲田三叶认识少年时代的土方、近藤等人，也受到了不少照顾。三叶和土方也互相爱慕着，然而，土方知道自己将来的命运会很坎坷，随时都会有生命危险，认为不会给三叶带来幸福，所以拒绝了三叶。不久后，男人们来到了江户开创新天地，把三叶留在了乡下。 这次三叶来到了江户，故事也就此展开……

银魂三叶篇的剧情讲述的是冲田总悟的姐姐冲田三叶和土方的悲恋故事，真选组三人组近藤勋、冲田总悟、土方十四郎都出身自武州，而冲田总悟的姐姐冲田三叶和土方互相爱慕，但是在三叶说要和土方一起去江户的时候，当时对于未来将会如何无法确定的土方，拒绝了三叶怕自己无法给三叶幸福。而总悟因为这件事恨十四，三叶则是将对十四的爱埋在了心里，想要与别人（藏场当马）结婚让十四看到幸福的自己不要再有所牵挂。但是三叶因为体虚病弱结婚的事情一再拖延，而且结婚对象藏场当马也不是什么善男信女，最后藏场的阴谋被真选组与万事屋挫败，而三叶则是在病床上永远的离开了人世。